Apronex

Testování exprese proteinu

1. Prokaryotická exprese
   
   
   
   • Test exprese ve vybraném bakteriálním kmeni E. coli zahrnuje optimalizaci kombinace insert / vektor / hostitel, přípravu fragmentu a vektoru, ligaci, transformaci, následnou izolaci,sekvenaci a uchovávaní DNA správných klonů. Sekvenací ověřená DNA je transformována do hostitelských buňěk a exprese proteinu je analyzována pomocí SDS-PAGE nebo Western blotu. Vliv média, teploty a indukčních podmínek na expresi proteinu je určen experimentálně pro jednotlivé proteiny. Míra exprese a distribuce proteinu mezi rozpustnou a nerozpustnou buněčnou frakci je analyzována pomocí SDS-PAGE nebo Western blotu.

2. Eukaryotická exprese


• Transientní exprese v savčích buňkách : Transientní exprese v savčích buňkách zahrnuje transfekci Vámi dodaného nebo námi připraveného expresního vektoru do vhodné buněčné linie a selekci pomocí antibiotické nebo jiné rezistence. Buněčný růst a životnost jsou monitorovány a exprese proteinu je analyzována pomocí metod SDS-PAGE/Western blot/dot blot.
  
  
• Stabilní exprese v savčích buňkách: Stabilní exprese v savčích buňkách zahrnuje kultivaci buněk, monitorování růstu a životnosti buněk. Exprese proteinu je identifikována pomocí metod SDS-PAGE/Western blot/dot-blot.
  
  
• Exprese v kvasinkových buňkách Pichia pastoris: Test exprese v kvasinkových buňkách spočívá v zaklonování požadovaného genu do vhodného expresního vektoru, transformaci do kompetentních buněk, izolaci DNA a sekvenaci. Sekvenací ověřená DNA je transformována do hostitelských buněk a exprese proteinu je analyzována pomocí SDS-PAGE, Western blotu nebo dot-blotu. Optimální podmínky pro expresi proteinu jsou stanoveny experimentálně a ověřeny pomocí SDS-PAGE.